外泌体研究

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EIQ3外泌体提取试剂盒

太阳集团官方版自主开发的EIQ3外泌体提取试剂盒不仅有效提高了外泌体得率,同时能够显著减少杂蛋白残留(如血清高丰度蛋白),相较于其他试剂盒,EIQ3应用于血浆外泌体全转录组测序的数据质量与超速离心更为接近。
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产品描述

 

       经典的超速离心法(差速离心)、密度梯度离心法在外泌体制备过程中经常受到大型仪器的资源限制,并且操作复杂、耗时、外泌体得率也低。太阳集团官方版自主研发的Exosome Isolation Q3(简称EIQ3)系列沉淀法外泌体提取剂盒,不仅有效提高外泌体得率,同时经过技术改良,能够显著减少杂蛋白残留(如血清高丰度蛋白)。该试剂盒可以实现血清、血浆、尿液、细胞上清等液质样本中外泌体的快速提取,为后期外泌体研究的数据稳定性和可靠性提供保障。

 

 
 

 

|   EIQ3外泌体提取试剂盒-产品规格

货号                    产品名称                                规格                  说明
EIQ3-01001  血清外泌体提取试剂盒 150 rxns  以200μL 血清样本为一次反应
EIQ3-02001  血浆外泌体提取试剂盒 150 rxns  以200μL 血浆样本为一次反应
EIQ3-03001   尿液外泌体提取试剂盒   10 rxns    以10mL 尿液样本为一次反应
EIQ3-04001  细胞上清外泌体提取试剂盒 10 rxns 以10mL 细胞上清样本为一次反应

                                                                      点击货号,下载试剂盒说明书   
|   EIQ3外泌体提取试剂盒-优势

●  外泌体纯度高(Quality)  

●  外泌体得率高(Quantity)

●  操作简便,周期短(Quick)

|   EIQ3外泌体提取试剂盒-操作流程

|   EIQ3外泌体提取试剂盒 - 实用效果

       应用太阳集团官方版EIQ3系列外泌体提取试剂盒提取的外泌体,可用于不同的外泌体鉴定实验,包括电镜观察,NTA分析,Western Blot鉴定外泌体marker等。以下实测结果以血清/尿液外泌体提取数据为例进行展示和分析:

 

 

EIQ3与超速离心等技术对比

案例   EIQ3提取的外泌体进行全转录测序的结果与UC更为接近

       上海交通大学医学院附属瑞金医院的科研人员开展了一项研究(PMID: 32716349),系统地比较了多种商业化试剂盒与UC法提取血浆外泌体的差异,以为科研人员选择商业化试剂盒提取外泌体提供的参考[6]。研究人员入组了9例癌症患者(其中正常对照、早期患者、转移患者各3例),将同组患者的血浆合并,总共得到3份血浆样本,每组的血浆样本分为6等分,分别采用5种商业试剂盒包括Wayen Exosome Isolation kit(WY,太阳集团官方版EIQ3)、ExoQuick(SBI)、miRCURY Exosome Kits(Qiagen)、Ribo Exosome Isolation Reagent(Ribo)、Total Exosome Isolation (Fisher)和UC(ultracentrifugation)分离外泌体。最后,对分离得到的外泌体进行转录组测序,比较各种分离方法在测序结果上的差异(图1)。

                            图1.各种外泌体提取试剂盒和超速离心方法的操作流程

       首先,各种试剂盒在提取的外泌体粒径上并无明显差异,检测的外泌体粒径均在100 nm左右(图2A)。但相对其他试剂盒,Wayen Exosome Isolation kit在外泌体提取浓度上相对较高,1mL血浆样本含有更多的外泌体颗粒,而UC提取的外泌体浓度在所有方法中相对较低(图2B)。

                    图2. 各种方法分离的外泌体粒径和浓度的比较

       随后,研究人员对提取的外泌体进行了RNA的建库,Wayen Exosome Isolation kit提取的外泌体RNA在200-1000bp片段范围内均得到更高的丰度(图3)。

          图3.各种方法分离的外泌体evRNA文库长度分布的比较

       接着,研究人员对比分析了各种试剂盒提取的血浆外泌体中各种类型RNA的比例,发现Wayen Exosome Isolation kit的表现和UC更为接近,所测得的short-noncoding RNA, pseudogene, long-noncoding RNA 及protein-coding genes比例基本相同,而其他试剂盒检测结果与UC存在较大差异(图4)。

          图4. 不同方法分离的外泌体中各类RNA的比例

       最后,关于各种方法提取的外泌体进行RNA的聚类分析,无论是Control组、primary组,还是metastatic组,同样是Wayen Exosome Isolation kit提取的外泌体RNA与UC组更为接近(图5)。

          图5. 不同方法分离的外泌体中RNA聚类分析

       总体来说,EIQ3提取的血浆外泌体在用于转录组分析上,其表现与UC更为接近。

       结合上述实验结果,以及UC和EIQ3的分离特点,我们提出如下建议:

1.  当我们样本量较少的时候,UC得到的外泌体量会较少,可以考虑采用太阳集团官方版EIQ3试剂盒;

2.  当我们样本量足够,想要得到更多外泌体或者浓缩外泌体用于下游实验的时候,可以考虑采用太阳集团官方版EIQ3试剂盒;

3.  当我们通过UC或者密度梯度离心获得的高纯度外泌体完成核酸或者蛋白组筛选后,进一步需要对个别分子进行验证实验的时候,采用太阳集团官方版EIQ3试剂盒提取外泌体更方便,也更容易标准化。

4.   针对外泌体核酸测序等实验,采用太阳集团官方版EIQ3试剂盒不仅能够接近UC的外泌体得率问题,而且能够获得与UC更为接近的核酸谱。

 

|   客户文献

[1].  Zhang Zhengchuan, Xu Ruogu, Yang Yang, et al. Micro/nano-textured hierarchical titanium topography promotes exosome biogenesis and secretion to improve osseointegration. J Nanobiotechnology, 2021, 19: 78.

[2]. Li Qijie, Fang Lu, Chen Junjie, et al. Exosomal MicroRNA-21 Promotes Keloid Fibroblast Proliferation and Collagen Production by Inhibiting Smad7. J Burn Care Res, 2021, 42: 1266-1274.

[3]. Liu Huawei, Zhao Fan, Zhang Kai, et al. Lactobacillus plantarumInvestigating the growth performance, meat quality, immune function and proteomic profiles of plasmal exosomes in -treated broilers with immunological stress. Food Funct, 2021, 12: 11790-11807.

[4]. Li Yun, Ji Jin, Lyu Ji, et al. A Novel Urine Exosomal lncRNA Assay to Improve the Detection of Prostate Cancer at Initial Biopsy: A Retrospective Multicenter Diagnostic Feasibility Study. Cancers (Basel), 2021, 13: undefined.

[5].  Song Zhiqi, Xu Yanfeng, Zhang Ling, et al. Comprehensive Proteomic Profiling of Urinary Exosomes and Identification of Potential Non-invasive Early Biomarkers of Alzheimer's Disease in 5XFAD Mouse Model. Front Genet, 2020, 11: 565479.

[6].  Peng C, J Wang, Bao Q, et al., Isolation of extracellular vesicle with different precipitation-based methods exerts a tremendous impact on the biomarker analysis for clinical plasma samples.  Cancer biomarkers : section A of Disease markers. 2020;29(3):373-385.

关键词:
外泌体、超速离心、外泌体提取、外泌体得率
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发布时间:2021-08-11 17:21:10

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